ГОСТ 31209-2003 Контейнеры для крови и ее компонентов. Требования химической и биологической безопасности и методы испытаний

Отправлено 14 окт. 2014 г., 22:22 пользователем Med Seven

Распространяется на полимерные стерильные контейнеры однократного применения (далее - контейнеры), предназначенные для взятия крови, разделения ее на компоненты, а также их хранения, транспортирования и переливания. 

стандарт устанавливает требования химической и биологической безопасности и методы проверки при приемочных, приемо-сдаточных и сертификационных испытаниях. 

требования настоящего стандарта являются обязательными.

Предисловие

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский институт стандартизации и сертификации в машиностроении» (ВНИИНМАШ)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 декабря 2003 г. No 24)

За принятие проголосовали.

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное паиыепоааиис национальною органа по стандартизации

Армения

Ш

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

КZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

МО

Молдова-Стандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Туркменистан

Главгосслужба «Туркменстандартлары»

Узбекистан

UZ

Узстандарт

Украина

UA

Минэкономразвития Украины

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. No 1323-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31209-2003 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2015 г.

5    Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 50855-96

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к наспюящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок—в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае переа/отра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования—на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартимформ. 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

п

ГОСТ 31209-2003

Содержание

1    Область применения....................................... 1

2    Нормативные ссылки....................................... 1

3    Термины и определения...................................... 2

4    Требования химической и биологической безопасности...................... 3

5    Методы испытаний ........................................ 5

Приложение А (обязательное) Средства контроля, вспомогательные устройства и химические

реактивы....................................... 20

Приложение Б (обязательное) Стенд для испытания контейнеров для хранения крови и ее компонентов на токсичность и    пироген ность.......................... 26

ill

ГОСТ 31209-2003

В случае выбраковки по не стерильности радиационно-стерилизованных контейнеров в течение первого года выпуска после устранения причины брака контролю на стерильность подвергают каждую партию контейнеров. При отсутствии в течение первого года выпуска выбраковки по не стерильности контролируют к аж дую 5-ю партию изделий, в последующем — каждую 15-ю.

4.4 Допустимые значения    санитарно

химических и биологических показателей

4.4.1 Значения сан итарн о-химических и токсикологических показателей, а также показателей стерильности и апирогенности должны соответствовать приведенным в таблице 1.

Таблица 1-Значения санитарно-химических,токсикологических показателей, показателей стерильности и апирогенности

Наименование группы

Перечень показателей

Допустимое значение

Номер пункта методов

показателей

испытаний

1 Санитарно-химические

показатели

1.1 Общие показатели

Восстановительны

Не более 1,0 мл

5.3.1

длявсех видов контейнеров

е

примеси

0,02 к. раствора

NajSjOj

Изменение

В пределах ±1,0

5.3.2

значения pH

Не более 0,2 в

5.3.3

Ультр афно летов ое

диапазоне 230—360 нм

поглощение

5.3.4

С о дер жанне метал

Не более 1,0 мг/л для

лов:

каждого элемента

Зарня; меди, свинца,

олова, хрома

Не более 0,1 мг/л

кадмия



ГОСТ 31209-2003

Окончание таблицы 1

Наименование группы показателей

Перечень показателей

Допустимое значение

Номер пункта методов испытаний

1.2 Дополнительные

Содержание

Не более

5.3.5

показатели для контейнеров из поливинилхлорид

внннлхлорнда

0,01мг/л

ного пластиката

Содержание дно к тнлфталата

Не более 10мг/100мл

5.3.6

2 Токсикологические показатели

Острая

токсичность

Нетоксично

5.4.1

Индекс токсичности

70 % —120 %

5.4.5

Г

Не более 2 Vo

5.4.4

Раздражающее пенс тв не

Сенснб нлнзнрую-щин эффект

Отсутствует

Отсутствует

5.42

5.43

3 Стерильность

Проросты

Отсутствуют

5.4.6

4 Апнрогенность

ЛПС

Не более 0,01 мкг/мл

5.47

5 Методы испытаний

5.1    Порядок подготовки к испытаниям

5.1.1    Отбор образцов

5.1.1.1    Для проведения испытаний контейнеров образцы отбирают из разных мест партии в количестве ОД %, но не менее указанного в таблице 2.

5.1.2 Приготовление вытяжек из контейнеров

5.1.2.1    Все работы по приготовлению вытяжек из контейнер ов

выполняют с соблюдением требований асептики.

ГОСТ 31209 -2003

Таблица 2 -Количество контейнеров, необходимое для испытаний

Вид

испытания

Вместимость контейнера, мл

Количество образцов для испытания, шт.

сани-

тарно-

хими-

ческого

токсикологи чес-кого

стериль

ности

пироген-

ности

с ум ЛИ

Приемоч

500 или 300

5

5

0,4-ч/т7

5

15+0,4>/w

ные и серти

500/300

4

5

0,4^

5

14 + 0,4 -Jn

фикационные

500/300/300

3

4

0,4-ч/т7

5

12 + 0,4 >/w

испытания

500/300/300/300

3

4

0,4^7

5

12+0,4 Jn

Приемо

500 или 300

3

3

0,4-\/i7

5

11 +0,4 -Jn

сдаточные

500/300

3

3

0,4 Jn

5

11 +0,4 -Jn

испытания

500/300/300

3

2

0,4-ч/т7

5

11 +0,4 -Jn

500/300/300/300

3

2

0,4л/)7

5

11 +0,4л//7

Обозначение:ЛГ- количество изделий в партии (серии). Количество изделий, отобранных для испытания на стерильность, не дал*но бьггь менее 3 и более 40 - при радиационной стерилизации, более 13 - при других видах стерилизации

5.1.2.2 Для проведения санитарно-химических и токсикологических испытаний не заполненных консервантом контейнеров образцы изделий извлекают из упаковки. Каждую емкость независимо от их числа заполняют дистиллированной водой через донорскую трубку (однокамерные контейнеры) или через надрез, сделанный на соединяющих емкости трубках (многокамерные контейнеры). Контейнеры вместимостью 500 мл заполняют 100 мл дистиллированной воды, контейнеры вместимостью 300 мл заполняют 50 мл дистиллированной воды. Вода должна быть равномерно распределена по всему изделию. Иглу герметизируют предохранительным колпачком, а соединительные трубки пережимают зажимами ниже надреза (ближе к мешку). Затем контейнеры выдерживают в термостате при температуре (70 + 2) °С в горизонтальном положении в течение 24 ч.

10

ГОСТ 31209-2003

В качестве контрольного раствора используют дистиллированную воду, помещенную в колбу со шлифом, которая термостатируется в тех же условиях

По истечении указанного срока контейнеры и контрольный раствор извлекают из термостата и охлаждают до комнатной температуры.

В первую очередь непосредственно из контейнеров производится отбор проб для определения хроматографически активных веществ по 5.3.5.3.

Оставшуюся часть вытяжек сливают в стеклянную емкость со шлифом.

5.1.2.3 Для санитарно-химических и токсикологических испытаний контейнеров с консервантом от партии отбирают необходимое количество незаполненных контейнеров, которые предварительно взвешивают. Затем незаполненные контейнеры заполняют дистиллированной водой через донорскую трубку путем пер едавливания дистиллированной воды из каждой предыдущей емкости в последующую по 100 г (для контейнеров вместимостью 500 мл) и 50 г (для контейнеров вместимостью 300 мл). Вода должна быть равномерно распределена в заполняемой емкости. Иглу герметизируют предохранительным колпачком, соединительные трубки пережимают зажимами.

В качестве контрольного раствора используют дистиллированную воду, помещенную в герметичный стеклянный флакон.

Затем заполненные водой контейнеры вместе с контрольными растворами помещают в стерилизатор, где они подвергаются одному циклу стерилизационного воздействия подобно контейнерам с консервантом.

В заводских условиях контейнеры, заполненные дистиллированной водой, и контрольный раствор стерилизуют одновременно с контейнерами, заполненными консервантом в том же стерилизаторе. После окончания стерилизационного воздействия

11

ГОСТ 31209-2003

контейнеры и контрольный раствор извлекают из стерилизатора и охлаждают до комнатной температуры.

В первую очередь непосредственно из контейнеров проводят отбор проб для хроматографически активных веществ по 5.3.5.3. Оставшуюся часть вытяжек сливают в стеклянную емкость со шлифом.

5.1.2.4    Приготовление вытяжек для контроля апирогенности Приготовление вытяжек для контроля на апирогенность

проводят

аналогично 5.1.2.2 и 5.1.2.3, используя в качестве экстрагента 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Заполненные 0,9 %-ным раствором хлорида натрия контейнеры помещают в термостат на 24 ч при температуре (37 ±

2)°С.

5.1.2.5    Приготовление смывов для контроля стерильности проводят по 5.4.6.

5.1.3 Контроль сырья

5.1.3.1 Для проверки сырья на соответствие санитарно-химическим и токсикологическим показателям 300 г полимерного материала (гранулята) помещают в стеклянную емкость со шлифом, заливают 1000 мл дистиллированной воды и выдерживают в термостате при температуре (70 ± 2) °С в течение 24 ч.

В качестве контрольного раствора используют дистиллированную воду, помещенную в колбу со шлифом, которая термостатируется в тех же условиях

По истечении указанного срока колбы с испытуемыми материалами и контрольными растворами извлекают из термостата и охлаждают до комнатной температуры. Вытяжку из материала сливают в колбу со шлифом

5.2 Средства контроля и вспомогательные устройства

12

ГОСТ 31209-2003

5.2.1    Средства контроля, вспомогательные устройства и химические реактивы, применяемые для испытаний, приведены в приложении А.

5.3 С а н и т а р н о - х и м и ч е с к и е испытания

По санитарно-химическим показателям изделия должны соответствовать требованиям, приведенным в таблице 1.

5.3.1    Определение в вытяжке восстановительных примесей (окисляемых веществ)

Определение восстановительных примесей относится к интегральным показателям и позволяет оценивать общее количество мигрирующих из контейнеров в водную вытяжку веществ восстановительного характера.

5.3.1.1    Методика определения восстановительных примесей

20 мл исследуемой вытяжки переносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 250 мл, снабженную притертой пробкой, прибавляют 20 мл раствора марганцовокислого калия (0,002 н.) и 1 мл серной кислоты (3    н.), закрывают колбу пробкой, осторожно

перемешивают содержимое колбы и оставляют стоять на 15 мин. По истечении указанного срока прибавляют 0,1 г йодистого калия и выделившийся йод титруют раствором серноватистокислого натрия (0,02 н.) до светло-желтого цвета. Затем добавляют 0,5 мл раствора крахмала (0,5 %) и продолжают титровать до обесцвечивания раствора. Титрование контрольного раствора проводят в тех же условиях. Для этого используют 20 мл контрольного раствора. Определение проводят не менее чем в двух параллельных пробах (из одной и той же вытяжки или контрольного раствора). Расхождение между параллельными пробами не должно превышать 0,05 мл 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия.

5.3.1.2    Обработка результатов

13

ГОСТ 31209-2003

Количество восстановительных примесей выражают в объеме 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия, затраченного на их определение (А V), мл, и рассчитывают по формуле

AV=VK- К

где К — объем 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия, израсходованного на титрование контрольного р аствора, мл;

Ve — объем 0,02 и. раствора серноватистокислого натрия, израсходованного на титрование вытяжки, мл.

Результат определения (с доверительной вероятностью 0,95) считается приемлемым, если расхождение между значениями V, не превышает 0,05 мл, и расхождение между значениями VKтакже не превышает 0,05 мл

За результат испытаний принимают среднее арифметическое двух приемлемых результатов определения, округленное до десятичных долей.

5.3.2 Определение изменения величины pH вытяжки

Величина pH характеризует кислотность или основность вытяжки.

5.3.2.1    Методика измерения

Испытуемую вытяжку и контрольный раствор помещают в стеклянный стакан и измеряют величину pH вытяжки и контрольного раствора.

5.3.2.2    Обработка результатов

Изменение величины pH — АрН рассчитывают по формуле ДрН= (pH)в - (pH)*

где (pH), — pH вытяжки;

(pH),. —pH контрольного раствора.

(pH) вытяжки рассчитывают как среднее арифметическое трех параллельных определений (с доверительной вероятностью 0,95), которые считают приемлемыми, если расхождение между наибольшим и наименьшим результатами определений не превышает 0,05 ед. pH.

Таблица 4 — Условия определения хрома, меди, свинца и кадмия атомно-абсорбционным методом

Элемент

Аналитическая линия, им

Рабочий to* иа лампу, мА

Тип

пламени

Высота горелки, мм

Ширина щели монохронометра, мм

Хром

357.9

5

Ацетилен-воздух

10

0.25

Медь

324.7

4

Пропан-воздух

14

0.25

Свинец

283,3

5

Пропан-воздух

14

0.25

Кадмий

228.8

4

Пропан-воздух

14

0.25

Таблица 5 — Условия определения олова и бария атомно-абсорбционным электротермическим методом

Анали-

Рабочий

Ширина

Температура

продолкитвльность обработки пробы

щели

моно-

_

Элемент

тическая

ток иа

1 IHpUIlMJ

Атом*

зация

ЛИНИЯ.

нм

лампу.

мА

хронометра мм

Темпе

ратура.

Продол

житель-

Темпе

рагура

Продол

житель

Темпе

ратура.

Продол

житель-

иость. с

•с

иость, с

иость. с

Олово

286.3

7.5

1.0

100

40

1700

10

2300

5

Барий

553.5

10

1.0

100

40

1500

10

2500

5

5.3.4.1    Проведение анализа

5.3.4.1.1    При определении хрома, меди, свинца и кадмия анализируемый раствор распыляют в пламени при условиях, указанных в таблице 4. и измеряют атомное поглощение. Одновременно измеряют атомное поглощение контрольного раствора. Значение атомного поглощения контрольного раствора вычитают из значения атомного поглощения анализируемого раствора. Объем анализируемого раствора на один элемент определения составляет 5 мл.

Массу хрома, меди, свинца и кадмия определяют по градуировочному графику.

5.3.4.1.2    При определении олова и бария микродозатором объемом 20мкп в графитовый анализатор последовательно вводят градуировочные растворы, контрольный и анализируемый растворы. Атоми-зация пробы осуществляется в атмосфере инертного газа аргона при условиях, указанных в таблице 5. Расход аргона — 0,5 л/мин. Атомное поглощение измеряют амплитудой пика, записываемой на самописец.

Массовую концентрацию олова и бария определяют по градуировочному графику.

5.3.4.1.3    Построение градуировочного графика

Для градуировки приборов применяют градуировочные растворы в соответствии с таблицей 6. Измеряют атомное поглощение приготовленных растворов, как указано в 5.3.4.1.

По полученным значениям атомного поглощения растворов и соответствующим им содержаниям определяемых элементов строят градуировочный график.

Таблица 6 — Градуировочная зависимость абсорбции от концентрации (линейный участок)

Элемент

Концентрация металлов о градуировочных растворах о мкг.'мп (линейным участок градуировочной зависимости атомного поглощения от концентрации)

Хром

0.02

0.05

0.1

0.5

Медь

0.02

0.05

0.1

0.5

Свинец

0.05

0.1

0.5

1.0

2.0

Кадмий

0.02

0.05

0.1

0.5

1.0

Олово

0.05

0.1

0.5

1.0

2.0

Барий

0.5

1.0

2.0

5.3.4.2 Абсолютная погрешность результатов анализа и допускаемые расхождения параллельных определений не должны превышать значений, указанных в таблице 7.

Таблица 7 — Диапазон и характеристики погрешностей результатов анализа при доверительной вероятности Р = 0.95

Элемент

Диапазон определяемых концентраций. мкл'мл

Абсолютная погрешность результатов анализа, мкг/мл

Допускаемое расхождение двух параллельных определений, мкл'мл

Хром

0.02-0.5

0.10 С+ 0.007

0.14 С+ 0.009

Медь

0.02—0.5

0,10 С + 0.088

0.14 С + 0.004

Свинец

0.05-2.0

0,10 С + 0.010

0.14 С+ 0.1

Кадмий

0.02—1,0

0,18 С + 0.008

0.25 С + 0.004

Олово

0.05—2.0

0.14 С + 0.01

0.18 С +0.01

Барий

0.5—2.0

0.12 С + 0.008

0.16 С+ 0.01

Обозначение: С -

— среднее арифметическое двух результатов анализа.

5.3.5 Определение винилхлорида

Методика предназначена для определения остаточных количеств мономера винилхлорида в вытяжках из контейнеров методом газожидкостной хроматографии равновесной паровой фазы («head space»).

5.3.5.1    Калибровка газового хроматографа

Калибровку прибора осуществляют с помощью растворов винилхлорида в дистиллированной воде. Все работы, связанные с приготовлением и использованием растворов винилхлорида, проводят с соблюдением условий герметичности. Стеклянный флакон вместимостью 60—65 мл заполняют взвешенным количеством дистиллированной воды (до 0.1 мг) так. чтобы объем незаполненного пространства составлял примерно 1.0 мл. Затем флаконы герметизируют с помощью резиновой прокладки и пластмассовой крышки с отверстием посередине. С целью предотвращения сорбции паров раствора резиновой прокладкой ее изолируют алюминиевой фольгой.

Затем во флакон вводят шприцем примерно 1 мл (около 2.5 мг) газообразного винилхлорида, массу которого определяют взвешиванием с точностью до 0.1 мг. Получают раствор с концентрацией винилхлорида примерно40 мг/л (раствор 1). который тщательно перемешивают в течение 15 мин. 1.5 мл полученного раствора вводят в стеклянный стакан вместимостью 60—65 мл. заполненный дистиллированной водой, как описано выше. Получают раствор винилхлорида с концентрацией примерно 1.1 мг/л (раствор 2). Из этих растворов, используя набор микрошприцев и флаконов, подготовленных аналогично вышеизложенному, готовят серию стандартных растворов с концентрациями 0.001—0.01 мг/л (из раствора 2) и 0.05—0.1 мг/л (из раствора 1). В заранее приготовленные загерметизированные пенициллиновые флаконы шприцем отбирают по 3 мл каждого из приготовленных стандартных растворов. Затем эти флаконы термостатируют на кипящей водяной бане в течение 40—50 мин. По истечении указанного времени подогретым шприцем отбирают по 2 мл паровой фазы из каждой пробы и вводят в испаритель хроматографа.

5.3.5.2    Условия хроматографирования

Температуры:

-    термостата колонок 60 вС:

-    испарителя 90 °С

-детектора 100 °С.

Скорости газов:

-    гелия 30 мл/мин:

-    водорода 30 мл/мин;

-    воздуха 300 мл/мин.

Время выхода винилхлорида 24 с.

Допускается изменение условий хроматографирования в пределах, обеспечивающих определение винилхлорида в соответствии с требованиями методики.

Площади пиков обсчитывают с помощью интегратора. При отсутствии интегратора площади пиков рассчитывают как произведение высоты на среднюю линию пика. Строят калибровочный график в

9

координатах: по оси абсцисс — концентрация винилхлорида С*,, мг/л, по оси ординат — площади пиков S, мкВ с. Продел обнаружения винилхлорида 0.0005 мг/л. Калибровку проводят не реже одного раза в месяц. В случае неисправности прибора после устранения неполадок необходимо откалибровать прибор заново.

5.3.5.3 Проведение анализа

Для определения винилхлорида в вытяжках от партии контейнеров отбирают не менее трех изделий. Вытяжки из контейнеров, приготовленные в соответствии с 5.3.5.1 и 5.3.5.2, отбирают непосредственно из изделий путем прокола иглой шприца донорской трубки. Из каждого контейнера отбирают не менее двух проб по 3 мл каждая.

3 мл отобранной вытяжки помещают в заранее подготовленные загерметизированные пенициллиновые флаконы. Затем флаконы термостатируют на водяной бане 40—50 мин. 2 мл паровой фазы отбирают подогретым шприцем и вводят в испаритель хроматографа.

Из каждого флакона для анализа отбирают не менее трех параллельных проб.

Концентрацию винилхлорида в вытяжке из контейнеров Смг/л. рассчитывают по формуле

Л

с - -

- Izl_*

п

где С, — концентрация винилхлорида в пробе, найденная по калибровочному графику, мг/л; п — число проб.

С целью оценки полученных результатов для выборки каждого отобранного из партии образца рассчитывают среднее арифметическое и среднее квадратическое отклонения, по которым уже для каждой выборки рассчитывают коэффициент вариации К:

К * — х 100%. х

где а — среднее квадратическое отклонение. х — среднее арифметическое отклонение.

В случае получения значения коэффициента вариации более 15 % хотя бы для одной из выборок, определение повторяют. Если значение коэффициента вариации для каждой из выборок менее или равно 15 %. то результат считают статистически значимым.

5.3.6 Определениедиоктилфталата (ДОФ) — пластификатора

Пластификатор ДОФ определяют в водной вытяжке из контейнеров путем экстракции его водно-спиртовым раствором с последующим снятием спектра поглощения в УФ области в диапазоне длин волн от 230 до 360 нм.

5.3.6.1    Построение калибровочного графика

Снимают спектры поглощения стандартных растворов с концентрацией ДОФ: 1, 2. 5. 10 и 20 мг/100 мл. В качестве раствора сравнения используют экстратрующий водно-спиртовой раствор. Строят график в координатах: по оси ординат — оптическая плотность при максимуме поглощения (О^,) при 272 нм. по оси абсцисс — концентрация ДОФ САОф. мг/100 мл.

5.3.6.2    Экстрагирование ДОФ

Через узел для взятия крови заполняют три пустых полимерных контейнера до половины их номинальной вместимости. Используют предварительно нагретый до температуры (37 ± 2) °С экстрагирующий водно-спиртовой раствор. Полностью удаляют из контейнеров воздух и герметично закрывают узел для взятия крови. Заполненные контейнеры в горизонтальном положении погружают на (60 ± 1) мин в водяной термостат, не встряхивая. По истечении указанного времени извлекают контейнеры из термостата, аккуратно перевертывают 10 раз и переливают содержимое контейнеров в стеклянную колбу со шлифом.

5.3.6.3    Определение ДОФ в вытяжках из контейнеров

Снимают спектр поглощения экстракта из контейнеров, используя в качестве раствора сравнения экстрагирующий водно-спиртовой раствор. Определение проводят не менее чем в двух параллельных пробах из одного и того же экстракта. Измеряют оптическую плотность при максимуме поглощения (Ц***).

5.3.6.4    Обработка результатов

Содержание ДОФ в экстракте определяют путем сравнения результатов, полученных для контейнеров. сданными калибровочного графика для стандартных растворов.

Ю

ГОСТ 31209-2003

Значение концентрации ДОФ рассчитывают как среднее арифметическое двух результатов параллельных определений (с доверительной вероят1юстью 0.95), которые считаются приемлемыми, если расхождение между ними не превышает 0.02 ед. оптической плотности.

Значение результатов определения округляют до десятичных долей.

5.4 Токсикологические исследования

Требования к изделиям по показателям токсичности должны соответствовать приведенным в таблице 1.

5.4.1    Определение острой токсичности на белых мышах

Вытяжки из изделий испытывают на беспородных белых мышах-самцах массой 18—25 г. прошедших 7-дневный карантин. В опытной и контрольной группах должно быть не менее 8 животных. Водные вытяжки в количестве 50 мл на килограмм массы тела животных вводят однократно внутрибрюшинно. Животным контрольной группы в том же объеме вводят дистиллированную воду. Через 24 ч после введения вытяжек состояние животных оценивают по следующим тестам:

-    масса тела в граммах —определяют до введения вытяжек и через сутки после введения, натощак;

• общее состояние животных; поведение, подвижность, состояние шерстного покрова — сразу после

введения, через 4 и 24 ч после введения;

-макроскопическая оценка состояния внутренних органов и тканей на вскрытии —животных через 24 ч умерщвляют декапитацией. Сначала вскрывают контрольную группу, затем подопытную, обращая внимание на область введения вытяжки, состояние подкожной клетчатки, брюшины, мышц брюшной стенки. региональных лимфоузлов и их протоков, внутренних органов;

-    взвешивание внутренних органов; печени, почек, селезенки — определение коэффициентов массы внутренних органов делением массы органа в миллиграммах на массу тела в граммах. Полученные цифровые данные подлежат статистической обработке с использованием критерия «t» Стьюдента. В случае получения достоверной разницы между подопытной и контрольной группами по двум из исследуемых показателей вытяжка из изделия признается токсичной. При обнаружении достоверного отличия по одному из показателей состояния животных испытания следует повторить на удвоенном количестве животных. При повторном обнаружении достоверных различий изделие считают токсичным. В случае гибели 1 — 2 животных испытание повторяют на удвоенном количестве животных (по 16 мышей в каждой группе). При гибели хотя бы одного подопытного животного при повторном испытании изделие считают токсичным.

5.4.2    Определение раздражающего действия на кожу белых крыс и слизистую глаза кролика

Определение раздражающего действия на кожу белых крыс и слизистую глаза кролика проводят на

белых крысах при нанесении экстракта из изделия на кожу выстриженного бока либо на кроликах при инсталляции экстракта в конъюнктивальный мешок глаза.

На белых крысах испытания проводят при ежедневном в течение 7 дней нанесении 1 мл экстракта из изделия на участок 2x2 см выстриженного бока. Контрольным животным аналогичным образом апплициру-ют контрольный раствор. В каждой группе должно быть по 8 животных. Каждый день до и после аппликации отмечают реакцию кожи на контакт с вытяжкой в соответствии с классификацией, приведенной в таблице 8.

Таблица 8 — Оценка кожно-раздражающего действия

Кокиая реакция

Оценка я баллах

Эритема

Нет эритемы

0

Очень слабая эритема

1

Отчетливая эритема

2

Средняя эритема

3

Сильная эритема (свекольно-красная)

4

Образование отека

Нет отека

0

Очень слабый отек

1

Отчетливый отек

2

Средний отек (возвышение на 1 мм)

3

Сильный отек (возвышение более 1 мм)

4

Общий возможный балл, оценивающий раздражение, — 8.

Для получения индекса раздражения для одного животного надо сложить баллы раздражения как по эритеме, так и по отеку для всех сроков обследования и разделить на число обследований. Общий индекс раздражения сравнивают с приведенным в таблице 9.

Таблица 9 — Оценка кожно-раздражающего действия

Кожная реакция

Средним балл

Не принимается но внимание

0—0.4

Слабая реакция

0.5—1.9

Средняя реакция

2—4.9

Сильная реакция

5—8

Изучение раздражающего действия на слизистую глаза проводят на 3 кроликах, которым в один глаз вносят вытяжку ежедневно в течение 5 дней с помощью пипетки по 1—2 капли. Состояние глаз контролируют через 1 и 24 ч, перед следующим воздействием.

Реакцию учитывают в соответствии со шкалой, приведенной в таблице 10.

Таблица 10 — Оценка раздражающего действия на слизистую глаза

Реакция слизистой оболочки

Оценка в баллах

Реакции нет

0

Легкое покраснение конъюнктивы

1

Покраснение конъюнктивы и частично склеры

2

Резкое покраснение конъюнктивы и всей склеры, гнойный офтальмит

3

Результаты обследования каждого из 3 кроликов суммируют и делят на число обследований. Общий индекс раздражения определяют по таблице 10.

5.4.3    Определение сенсибилизирующего действия на белых крысах

Определение сенсибилизирующего действия проводят на белых крысах. В каждой группе должно быть не монее 8 животных. Сенсибилизируют животных при введении 0.02 мл вытяжки из контейнеров в кожу наружной поверхности уха. Контрольным животным вводят контрольный раствор—дистиллированную воду. Через 10 дней проводят 5—7 ежедневных эпикутанных аппликаций вытяжки, нанося на кожу выстриженного бока по 0.5 мл вытяжки. На следующий день после последней аппликации проводят провокационную внутрикожную пробу. Для этого 0.02 мл вытяжки инъецируют в кожу другого выстриженного бока животного. Реакцию на провокационную внутрикожную пробу отмечают через 15 мин, 24 и 48 ч, отмечая интенсивность покраснения и площадь гилеремированного участка. Через 48 ч после введения виутри-кожной пробы животных забивают декапитацией. отбирая кровь для проведения специфических иммунологических реакций. Используют иммунологические тесты, основанные на определении образования комплекса антиген-антитело: реакцию деграиуляции тучных клеток (РДТК). реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ). реакцию специфического лизиса лейкоцитов (PCCJI). До начала проведения иммунологических специфических реакций необходимо тщательно подобрать рабочую концентрацию вытяжки, не вызывающую денатурации сывороточных белков и не оказывающую цитотоксического действия.

У забитых животных определяют коэффициенты массы иммунокомпетентных органов — селезенки и тимуса и обрабатывают полученный материал статистически с определением коэффициента «Ь> Стьюдента.

При оценке сенсибилизирующего эффекта учитывают результаты внутрикожной пробы, определения коэффициентов массы внутренних органов и иммунологических тестов с кровью животных.

5.4.4    Определение гемолитической активности

5.4.4.1    Принцип метода — определение гемолитического действия вытяжки по 100%-ному гемолизу.

5.4.4.2    Вытяжки готовятся в соответствии с 4.1.

5.4.4.3    Приготовление 10%-ной взвеси эритроцитов

Для приготовления взвеси эритроцитов может быть использована эритроцитная масса или цитратная кровь, заготовленная на 3.9%-ном растворе цитрата натрия в соотношении 1:9. Срок хранения цитратной

12

ГОСТ 31209-2003

крови (эритроцитной массы) 72 ч при температуре от 4 °С до 6 вС. 5 мл крови (эритроцитной массы) центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 8 мл стерильного 0.9%-ного раствора хлористого натрия. Содержимое взбалтывают и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Эту операцию (отмывание клеток) повторяют два раза. После отмывания над осадочная жидкость должна быть прозрачна, бесцветна и не иметь следов гемолиза.

Если надосадочная жидкость не отвечает указанным требованиям, эритроциты не могут быть использованы для приготовления взвеси.

Для получения 10%-ной взвеси эритроцитов 1 мл осадка клеток смешивают с 9 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Полученную взвесь эритроцитов допускается хранить не более 24 ч при температуре от 4 вС до 6 °С в холодильнике.

5.4.4.4    Приготовление проб (контрольной и с 100%-ным гемолизом)

5.4.4.4.1а) Контрольная проба—0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл 0.9%-ного раствора хлористого натрия — для контейнеров «Компо пласт».

б) Контрольная проба — 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл раствора «Глюгицир» (в стекле), используемого в качестве контрольного образца данной испытуемой партии. — для контейнеров «Гемакон».

5.4.4.4.2 Проба с 100%-ным гемолизом: 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов и 5 мл дистиллированной воды — происходит полное разрушение эритроцитов, что соответствует 100%-ному гемолизу.

Контрольную пробу и пробу с 100%-ным гемолизом готовят для каждого образца эритроцитной взвеси.

5.4.4.5    Проведение определения

В три пробирки помещают по 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов. К 0.5 мл 10%-ной взвеси эритроцитов в каждую пробирку прибавляют по 5 мл вытяжки, в которую предварительно добавлен хлористый натрий. Смесь ставят в термостат на 1 ч при температуре (37 ± 2) вС. затем центрифугируют в течение 20 мин при 2000 об/мин.

Все манипуляции по отношению к контрольной пробе и пробе с 100%-ным гемолизом проводят параллельно с опытными пробами, как описано выше. Надосадочную жидкость отделяют для проведения измерений оптической плотности.

5.4.4.6    Оптические измерения

Оптическую плотность опытной, контрольной пробы и пробы с 100%-ным гемолизом измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм против «холостой» пробы (вода). Толщина кюветы 1 см.

Результаты регистрируют по оптической плотности.

5.4.4.7    Расчет процента гемолиза проводят по формуле

Процент гемолиза = —т;—— х 100 хК.

сюо

где Еас — оптическая плотность опытной пробы:

£к — оптическая плотность контрольной пробы:

£,оо — оптическая плотность воды со взвесью эритроцитов —100%-ный гемолиз;

К — поправочный коэффициент, учитывающий дополнительное разбавление дистиллированной водой при условии, что £,оо > 1.0.

Примечание — Если оптическая плотность контрольной пробы (10%-ная эритроцитная взвесь с 0.9%-ным раствором хлористого натрия) составляет 0.03 и более, результаты всего опыта недостоверны и не учитываются.

Оптическая плотность раствора с 100%-ным гемолизом должна быть не менее 0.8 и но болев 1.0.

В случае отклонения от указанного предела опыт следует повторить с вновь приготовленной эритроцитной взвесью.

5.4.4.8    Оценка результатов

Испытуемое изделие свободно от гемолитически действующих веществ, если процент гемолиза во всех трех пробах менее двух.

Если процент гемолиза одной пробы более 2. опыт следует повторить. При получении такого же результата вытяжку считают гемолитически активной, и дальнейшие испытания не проводят.

В случае отсутствия гемолитического действия проводят дальнейшие токсикологические испытания.

13

5.4.5 Определение индекса токсичности на сперматозоидах быка

5.4.5.1    Все растворы в течение эксперимента должны находиться при постоянной температуре (40 + 1,5) °С.

5.4.5.2    Для определения индекса токсичности опытного раствора необходимо сравнить его с контрольным (модельным) раствором. В качестве контрольного раствора выбирают глюкозо-цитратную среду (глюкоза — 4 г, цитрат натрия 1 г. дистиллированная вода 100 мл). Контрольная среда одновременно является разбавителем для оттаивания замороженной спермы. Опытным раствором является вытяжка из изделия, доведенная до изотонии глюкозой и цитратом (глюкоза — 4 г. цитрат 1 г. вытяжка 100 мл). Контрольный и опытный растворы по 1 мл помешают в пробирки с притертыми пробками и ставят в водяную баню при температуре (40 + 1.5) еС. Контрольный и опытный растворы приготавливают заранее, за час до начала эксперимента.

5.4.5.3    Оттаивание замороженной спермы

Дозируют в пробирки по 0.25 ил и 0.5 мл разбавителя и ставят их в водяную баню при температуре (40 + 1.5) °С. Охлажденным до температуры жидкого азота анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор. НЕ ДОПУСКАЕТСЯ ОТТАИВАТЬ НЕСКОЛЬКО ГРАНУЛ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ! Сразу после размораживания содержимое пробирок с целью приготовления маточного раствора спермы сливают в пробирку и тщательно перемешивают.

5.4.5.4    Приготовление рабочих образцов

В каждую пробирку контрольной и опытной серий помещают по 0,2 мл маточного раствора спермы.

5.4.5.5    Подготовка пробы к исследованию

Каждый рабочий образец переносят в кювету. Кювету герметизируют, устанавливают в кюветодержа-тель и помещают в стенд.

5.4.5.6    Накопление экспериментальных данных

Нажатием кнопки «ПУСК» включают процесс накопления данных. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех кюветах отжатием кнопки «ПУСК» производят остановку процесса накопления данных.

5.4.57 Обработка экспериментальных данных

Обработку экспериментальиых данных осуществляют с помощью компьютера. Для каждого образца рассчитывают среднее время подвижности (.р в условных единицах

Цт, х /)

Im,

где т, — /-е значение показателя подвижности;

/ — текущий номер оценки показателя подвижности.

Для контрольной и опытной выборок образцов вычисляют среднее арифметическое значение и среднее квадратическое отклонение, по которым в свою очередь рассчитывают для каждой выборки коэффициент вариации С по формуле

С ^ -2-х 100%,

где a — среднее квадратическое отклонение; х — среднее арифметическое отклонение.

В случае получения значения коэффициента вариации более 15 % хотя бы для одной из выборок, эксперимент повторяют. Если значение коэффициента вариации для каждой из выборок меньше или равно 15 %. результаты считаются статистически верными.

Затем рассчитывают индекс токсичности I, по формуле

Г°

/ 100%,

«т лс ер

где F£, Г‘р — среднее арифметическое значений среднего времени подвижности для опытной и контрольной выборок образцов соответственно.

5.4.5.8 Оценка результатов контроля

Испытуемую партию изделий считают нетоксичной, если индекс токсичности в пределах 70 % —120 %. Во всех остальных случаях партию изделий считают токсичной.

ГОСТ 31209-2003

5.4.6 Испытания на стерильность

5.4.6.1    Испытания на стерильность методом прямого посева

5.4.6.1.1    Отбор проб

Количество проб, отбираемых для первичного посева, составляет 0.4 Jn . где W — количество изделий в серии или партии.

Максимальное количество проб, отбираемых для первичного посева, составляет: 13 — при паровом методе стерилизации: 40 — при радиационном методе стерилизации.

Кроме изделий, направленных непосредственно на анализ, отбирают также дубликаты в тройном количестве: две части из них используют в случае необходимости для повторного контроля, одну часть оставляют для арбитражного хранения.

5.4.6.1.2    Испытания на стерильность

Испытания на стерильность проводят методом прямого посева в тиогликолевую среду. Посевы помещают в термостат при температуре 32 °С и выдерживают 8 сут при паровом методе стерилизации или 14 сут при радиационном методе стерилизации, после чего проводят учет результатов.

5.4.6.2    Испытания на стерильность с использованием биотестов

5.4.6.2.1    Методика контроля стерильности полимерных контейнеров, стерилизованных паровым методом с помощью биотестов

5.4.6.2.1.1    Требования к биотесту

5.4.6.2.1.1.1    Биотест представляет собой носитель (инсулиновый флакон), содержащий споры микроорганизмов Вас. Stearothrmophilus ВКМ В-718 с регламентированной устойчивостью к пару.

5.4.6.2.1.1.2    Биотесты поставляются в комплекте, состоящем из носителей с высушенными спорами микроорганизма: цветной питательной среды, стерильного шприца и стерильных резиновых пробок размером 6.5. термовременных бумажных индикаторов: соответствующих эталонов цвета питательной среды и тормоиндикаторов. а также инструкции по применению комплекта. Изготовитель биотестов должен быть аттестован.

5.4.6.2.1.1.3    Каждая партия биотестов сопровождается паспортом с указанием.

-    метода стерилизации, для которого предназначен биотест:

-    названия культуры микроорганизма;

-    количества спор в биотесте;

-    устойчивости биотеста к пару;

* номера партии:

-    срока годности;

-    условий хранения;

-    наименования предприятия-изготовителя.

5.4.6.2.1.2    Контроль стерильности

5.4.6.2.1.2.1 Контролю подвергают каждую серию продукции, изготовленную на одном предприятии и простерилизованную в одной стерилизационной камере за один цикл. Биотесты должны быть упакованы в пакеты из упаковочной бумаги, запечатанные в полиэтиленовые пакеты.

5.4.62.1.2.2    Число и расположение биотестов в стерилизационной камере зависят от размера камеры и типа стерилизатора (прямоугольный, круглый) в соответствии с таблицей 11.

Таблица 11 — Расположение контрольных точек в паровых стерилизаторах

Емкость камеры стерилизатора, дм1

Общее число контрольных точек

Расположение контрольных точек

а стерилизационных коробках

вне стерилизационных коробок

До 100

5

3

2

Св. 100 до 750

11

9

2

Св. 750

12

11

2

Примечание — Точка 1 — у загрузочной двери; 2 — у противоположной стенки (разгрузочной двери); 3 — 13 — внутри стерилизационной камеры на разных уровнях или внутри стерилизуемых упаковок.

15

5.4.6.2.1.2.3    На предприятиях, длительное время осуществляющих стерилизацию на собственной базе, периодичность контроля, количество биотестов, помещаемых в камеру, могут быть изменены.

5.4.6.2.1.2.4    Методика и техника исследования биотестов

После цикла стерилизации биотесты извлекают и собирают в полиэтиленовый пакет, где они хранятся до проведения контроля стерильности. Для определения жизнеспособности популяции спор носители (флаконы) вынимают из защитной упаковки (до исследования флаконы допускается хранить 2 недели в холодильнике). Резиновую пробку флакона с индикаторной питательной средой обрабатывают спиртом и прокалывают стерильной иглой с ватным фильтром. Затем пробку прокалывают иглой шприца и набирают в него питательную среду из флакона. Над огнем спиртовки в каждый биотест наливают примерно по 1 мл цветной питательной среды, флаконы закрывают стерильной резиновой пробкой и оставляют в термостате при 55 °С на 48 ч.

5.4.6.2.1.2.5    Обработка результатов

Обработку результатов исследования биотестов проводят после термостатирования в течение 48 ч. Предварительный учет результатов проводят через 24 ч.

О гибели спор в биотесте в процессе стерилизации свидетельствует неизменный цвет по всех биотестах-флаконах. После сравнения с эталонами делается вывод об эффективности процесса стерилизации и о стерильности данной партии продукции. Если цвет питательной среды во флаконе-биотесте в процессе термостатирования изменился на желтый, это свидетельствует о наличии жизнеспособных микроорганизмов. В этом случае для убедительности проводят бактериологический анализ (если в данном учреждении имеется бактериологическая лаборатория) выросших микроорганизмов. При выявлении роста тест-культуры (Вас. StearothrmophHus)aer\aer(^i вывод о неэффективности процесса стерилизации и о нестерильности данной партии продукции.

5.4.62.2 Методика контроля стерильности полимерных контейнеров, стерилизованных радиационным методом с помощью биотестов.

5.4.6.2.2.1    Требования к биотесту

5.4.6.2.2.1.1    Биотест представляет собой носитель (шприц инъекционный однократного применения 2А или 5Б Луер по ГОСТ ISO 7886-1). содержащий споры культуры микроорганизмов с радиорезистентностью не менее 2.1 кГр, например. Вас. Subtilis JSY 228.

5.4.6.2.2.1.2    Биотесты поставляются в комплекте, состоящем из носителей со спорами и индикаторной питательной среды, расфасованной во флаконы. Изготовитель биотестов должен быть аттестован.

5.4.6.2.2.1.3    Каждая партия биотестов сопровождается паспортом с указанием:

-    метода стерилизации, для которого предназначен биотест.

-    стерилизующей дозы, на которую рассчитан биотест;

-    названия культуры микроорганизмов;

-    количества микробных клеток;

-    радиорезистентности культуры микроорганизмов;

-    номера партии;

-    срока годности,

-    условий хранения;

-    наименования предприятия-изготовителя.

5.4.6.2.2.2 Контроль стерильности

5.4.6.2.2.2.1    Контролю стерильности подвергают каждую партию стерилизуемой продукции. Партией считают однотипную продукцию, изготовленную на одном предприятии и простерилизованиую за один технологический цикл. Для проведения контроля биотесты помещают в коробки (ящики) с продукцией между индивидуальными упаковками. В каждую коробку (ящик) укладывают 5 биотестов. Каждую коробку (ящик), содержащую биотест, маркируют. Коробки (ящики), содержащие биотесты, облучают одновременно с контролируемой продукцией. Допускается использовать фантомы, имитирующие облучаемую продукцию.

5.4.6.2.2.2.2    Для гамма-установок с периодическим технологическим циклом на каждый цикл 3 коробки (ящика) с биотестами размещают в местах поля гамма-установок с наименьшей мощностью дозы. Для гамма-установок с непрерывным технологическим циклом коробку (ящик) с биотестами помещают на транспортное устройство через каждые 2 ч работы установки, но не менее 3 коробок на партию продукции. Для ускорителей электронов, работающих в циклическом режиме, на каждый цикл используют одну коробку (ящик) с биотестами. Для ускорителей электронов, работающих в непрерывном режиме. — одну коробку через каждые 2 ч работы, но не менее 3 коробок на партию продукции.

ГОСТ 31209-2003

5.4.6.2.2.2.3    На предприятиях, осуществляющих стерилизацию на собственной базе, по результатам оценки санитарно-гигиенического состояния производства, технологии стерилизации, вида стерилизуемой продукции могут быть изменены периодичность контроля, количество биотестов, помещаемых в коробку, количество коробок, используемых для контроля, период их помещения на транспортное устройство.

5.4.6.2.2.2.4    Методика и техника исследования биотестов

После проведения облучения партии продукции работник службы контроля качества предприятия извлекает биотесты из коробок (ящиков) и собирает в полиэтиленовый пакет, где они хранятся не менее 24 ч до проведения контроля стерильности.

Для определения жизнеспособности популяции микроорганизмов носители (шприцы) вынимают из защитной упаковки (до исследования шприцы допускается хранить в защитной упаковке 2 недели в холодильнике). снимают колпачок с иглы, прокалывают иглой обработанную спиртом резиновую пробку флакона с индикаторной питательной средой и. не освобождая цилиндр от воздуха, набирают в цилиндр 1 мл питательной среды. Колпачок вновь надевают на иглу, а шприц с питательной средой возвращают в пакет и устанавливают в термостате при температуре (37 ± 1) °С. Пакет помещают таким образом, чтобы шприц оказался иглой вниз. Биотесты помещают в термостат и оставляют в термостате на 48 ч.

5.4.6    2.2.2.5 Обработка результатов

Обработку результатов исследования биотестов проводят после термостатирования в течение 48 ч. Предварительную обработку результатов проводят через 24 ч.

О гибели микроорганизмов в шприце-биотесте в процессе стерилизации свидетельствует неизменный цвет питательной среды (зеленый). Сохранение цвета питательной среды во всех шприцах-биотестах свидетельствует об эффективности процесса стерилизации и о стерильности данной партии продукции.

Изменение цвета питательной среды в шприце в процессе термостатирования на желтый свидетельствует о наличии жизнеспособных микроорганизмов. В этом случае проводят бактериологический анализ выросших микроорганизмов. При выявлении роста тест-культуры делают вывод о неэффективности процесса стерилизации и о нестерильности данной партии продукции.

5.4.7    Испытания на пирогенность

5.4.7.1    Испытание на пирогенность на кроликах

Отбор, содержание, подготовку животных к испытаниям, повторность их использования проводят по Государственной Фармакопеи* XI издания.

Тест-доза —10 мл на килограмм массы кролика. Вытяжку вводят в ушную вену.

Испытуемую партию продукции считают непирогенной, если после введения вытяжки ни у одного из 3 подопытных кроликов ни при одном из трех измерений не наблюдалось повышение температуры более чем на 0.6 °С по сравнению с исходной температурой и в сумме повышение температуры при каждом измерении у 3 кроликов не превышало 1.4 °С.

Если у одного или двух кроликов температура повысилась более чем на 0.6 °С и в сумме при каждом измерении у 3 кроликов повышение температуры составило более 1.4 °С. испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах.

Партию полимерных контейнеров считают непирогенной. если не более чем у 3 из 8 кроликов наблюдалось индивидуальное повышение температуры не более чем на 0.6 вС. и общая сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышала 3.7 °С.

Допускается максимальное понижение температуры на 0.6 вС. В случае понижения температуры у одного кролика более чем на 0.6 °С испытание повторяют на 5 кроликах.

Партию полимерных контейнеров считают непирогенной, если после повторного исследования ни у одного из 5 кроликов максимальное понижение температуры не превысило 0.6 °С . и не более чем у 2 кроликов из 5 температура понизилась на 0.6 “С по сравнению с исходной. В противном случае партию контейнеров бракуют.

5.4.7.2    Испытание на пирогенность методом реакции связывания комплемента

5.4.7.2.1    Приготовление раствора антител

Берут длинным анатомическим пинцетом замороженную гранулу антител из сосуда Дьюара и помещают в пробирку.

5.4.7.2.2    Приготовление раствора антигена концентрацией 5 минимальных пирогенных доз в миллилитрах.

Вскрывают ампулу с липополисахаридом. содержащую 500 минимальных пирогенных доз в 1 мл. 0.1 мл этого препарата переливают в пробирку с 0.9 мл апирогенного раствора хлорида натрия. Приготов-

17

Действует на территории Российской Федерации

ленный раствор тщательно перемешивают, при этом концентрация антигена в нем составляет 50 минимальных пирогенных доз в 1 мл. Берут 0,1 мл этого раствора и переливают в пробирку с 0.9 мл апирогенного раствора хлорида натрия. После этого концентрация антигена будет составлять 5 минимальных пирогенных доз в 1 мл.

5.4.7.2.3 Приготовление раствора комплемента

Берут длинным анатомическим пинцетом гранулу замороженного комплемента и помещают в пробирку.

5.47.2.4    Приготовление опытного образца

В пробирку с притертой пробкой наливают 1 мл испытуемого образца вытяжки, антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.47.2.5    Приготовление контрольного образца с отрицательной реакцией

В пробирку с притертой пробкой наливают 1 мл раствора хлорида натрия, антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.47.2.6    Приготовление контрольного образца с положительной реакцией

В пробирку с притертой пробкой наливают 0.1 мл раствора антигена по 5.47.2.2 и добавляют антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.47.27 Опытный и контрольные образцы помещают в термостат. Проводят инкубацию в течение 18 — 24 ч при температуре (27 ± 2) "С в термостате или при температуре (5 ± 2) °С в холодильнике. Рекомендуемый температурный режим — в соответствии с указанным в паспорте.

5.47.2.8    Приготовление биосеисориой системы

В пробирки отмеряют пипеткой объем разбавителя, указанный в паспорте, ставят их в водяную баню при температуре (40*1,5) °С. В каждую пробирку добавляют объем антител, указанный в паспорте, тщательно перемешивают встряхиванием. Длинным анатомическим пинцетом, охлажденным до температуры жидкого азота, извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор. После оттаивания гранулы содержимое пробирки перемешивают и выдерживают 15 мин. НЕ ДОПУСКАЕТСЯ ОТТАИВАТЬ НЕСКОЛЬКО ГРАНУЛ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ! Содержимое пробирок сливают в одну и перемешивают встряхиванием. Получается маточный раствор спермы.

5.47.2.9    Приготовление рабочих образцов

В каждую пробирку контрольной и опытной серий добавляют по 0.2 мл маточного раствора спермы.

5.4.7.2.10    Подготовка пробы к исследованию на стенде

Каждый рабочий образец переносят в кювету. Затем кювету устанавливают в кюветодержатель стенда.

5.4.7.2.11    Проведение накопления экспериментальных данных

Нажатием кнопки «ПУСК» включают процесс накопления. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех кюветах или по желанию оператора проводят остановку процесса накопления данных отжатием кнопки «ПУСК».

5.4.7.2.12    Обработка экспериментальных данных

Для каждого образца выживаемость S рассчитывают по формуле

П

S Л Хгл, ,

f-1

где т, — i-e значение показателя подвижности;

/ — текущий номер оценки показателя подвижности: п — количество оценок показателя подвижности.

5.4.7.2.13 Оценка результатов контроля

5.4.7.2.13.1 Если для контрольных образцов с положительной и отрицательной реакциями выполнено соотношение

S4" =, S*°.

где S™ и Svo —среднее арифметическое выживаемости выборок образцов положительного и отрицательного контроля, то оценивают результаты испытаний образцов по 5.47.2.13.2. В любом другом случае испытания повторяют, начиная с 5.47.2. Если при повторных испытаниях результат будет таким же, испытания повторяют с новым набором реактивов и посуды.

ГОСТ 31209-2003

5.4.7.2.13.2 Оценка результатов испытаний образца вытяжки Если S™ > S°. образец считают апирогенным: если S° 2 S*n .образец признают пирогенным.

где ЗГ° — среднее арифметическое выживаемости выборки образцов опыта.

При обнаружении пирогенности испытания по 5.4.7.2 необходимо повторить. При этом вытяжку приготавливают из вновь отобранных изделий. При получении такого же результата вытяжку признают пирогенной.

Результаты приемочных испытаний оформляют токсикологическим заключением. Результаты приемосдаточных и сертификационных испытаний оформляют протоколами.

19

Приложение А (обязательное)

Средства контроля. Вспомогательные устройства и химические реактивы

Таблица А.1

Примерное оборудование реактивы

Требования к оборудованию и реактивам

процедура

мех государе таенного стандарта

Приготовление

Оборудование

вытяжек

Термостат

Стерилизатор воздушный Стерилизатор паровой

Весы

Температура (70 ± 2) "С Температура (180 ± 2) *С Температура (120 ± 2) "С Давление пара.

(1.1 +0.2) кг/см3

Погрешность взвешивания 0.1 г

Колбы конические со шлифом

Обьем 250. 500. 1000 мл

ГОСТ 1770

Бутылки стеклянные для крови, трансфузионных и инфузионных препаратов

Объем 250 мл

ГОСТ 10782

Санитарно-химические испытания

Восстанови-

Цилиндр

Реактивы

Вода дистиллированная Стерильный, а пирогенный, изотонический раствор 0.9%-ного хлорида натрия

Оборудование

Обьем 50 и 100 мл

ГОСТ 1770ГОСТ 6709

гельные примеси

Весы аналитические Секундомер

Погрешность взвешивания 0.0002 г

ГОСТ 8.423

Бюретка

Обьем 5 мл;

цена деления 0.02 мл

ГОСТ 29251

Колбы мерные

Обьем 100 и 1000 мл

ГОСТ 1770

Пипетки мерные

Обьем 0.1—20 мл

ГОСТ 29227

Колбы конические со шлифом Реактивы

Обьем 250 мл

ГОСТ 1770

Калий марганцовокислый КМп04 0.1 н. раствор;

Х.Ч.

ГОСТ 20490

Натрия тиосульфат кристаллический 0.1 н. раствор;

0.002 н. раствор (готовят в день проведения анализа из 0.1 н. раствора)

хм.

ГОСТ 244

Калий йодистый

хч

ГОСТ 4232

Кислота серная H2S04 2 н. раствор (готовят из концентрированной H2S04 плотностью 1.84 г/мл)

х.ч.. плотность 1.84 г/мл

ГОСТ 4204

Крахмал растворимый 0.5%-ный раствор

хч

ГОСТ 10163

ГОСТ 31209-2003

процедура

Примерное оборудование, реактивы

Требования с оборудованию и реактивам

Обозначение

межгосударственного

стандарта

Изменение ве-

Оборудование

личины pH выгяж-

рН-метр

Тип pH-121

ки

Стакан химический Реактивы

Объем 50 мл

ГОСТ 23932

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709

Ультра фиоле-

Оборудование

тоеое поглощение

УФ-спектрофотометр

Рабочий диапазон длин волн от 230 до 360 нм

Кюветы из кварцевого стекла

Толщина 1.0

Определение

Оборудование

металлов

Спектрометр атомно-флюорес-центный для определения хрома.

ТипАФА «Кеанг-444»

меди, свинца, кадмия

Спектрометр атомно-абсорбии-

Тип «Квант-Зееман

онный с графитовым атомизатором для определения олова и бария

ЭТАП-233в

Самописец

Тип СП-КСП-4

ГОСТ 7164

Микродозатор пипеточный

Тип П1-0.02

Лампы с полым катодом на хром, медь, свинец, кадмий, олово и барий

Тип ПТ-2

Весы лабораторные аналитичес-

2-й класс точности

ГОСТ 24104

кие

Ацетилен растворенный и газообразный

ГОСТ 5457

Пропан-бутан: смесь в баллонах Воздух окагый в баллонах'

ГОСТ 17433

Аргон высокой чистоты Редуктор ацетиленовый Плитка электрическая с закры-

ГОСТ 14919

той спиралью

Пипетки градуировочные

Объем 1—10 мл

ГОСТ 29227

Колбы мерные

Объем 25—500 мл

ГОСТ 1770

Стаканчики (бкжса) для взвеши-

Тип СВ

ГОСТ 25336

вания

Стаканы термостойкие

Объем 50—100 мл

ГОСТ 25336

Реактивы

Кадмий высокой чистоты

ГОСТ 22860

Свинец высокой чистоты

ГОСТ 22861

Олово металлическое

ГОСТ 860

Медь металлическая

ГОСТ 859

Хром металлический

ГОСТ 5905

Барий хлористый

ГОСТ 4108

Кислота азотная

ГОСТ 4461

Кислота соляная

ГОСТ 3118

Вода дистиллированная Стандартный раствор хрома кон-

Устойчив в течение года

ГОСТ 6709

центрацией 1 мг/мл.

готовят следующим образом: 0.5000 г хрома растворяют в

30 мл 18%-ной (об.) соляной кислоты доводят до 500 мл дистиллированной водой

21

Вид испытания, процедура

Примерное оборудование, реактивы

Требования к оборудованию и реактивам

Определение

Стандартные растворы меди.

Устойчивы в течение

металлов

свинца и кадмия концентрацией 1 мг/мл; готовят следующим образом:

0.5000 г соответствующего металла растворяют в 20 мл 50%-ной (об.) азотной кислоты, доводят до 500 мл дистиллированной водой

года

Стандартный раствор олова кон-

Устойчив в течение 2 мес.

центрацией 1 мг/мл; готовят следую-

Хранят в полиэтилено-

щим образом:

0,5000 г олова растворяют в 40 мл царской водки, добавляют 60 мл концентрированной азотной кислоты, доводят до 500 мл дистиллированной водой

вой посуде

Стандартный раствор бария концентрацией 1 мг/мл; готовят следующим образом:

0.8893 г бария хлорида 2-вод-ного растворяют в дистиллированной воде, добавляют 20 мл концентрированной соляной кислоты, доводят до 500 мл дистиллированной водой

Устойчив в течение года

Растворы хрома, меди, свинца.

Устойчивы в течение

кадмия, бария и олова концентра-

2—3 мес.

цией 0.1 мг/мл; готовят разбавлени-

Раствор олова хранят в

ем соответствующих стандартных

полиэтиленовой посуде: ус-

растворов концентрацией 1 мг/мл дистиллированной водой

тойчив в течение 2 недель

Градуировочные растворы кон-

Устойчивы в течение

центрацией металлов 2 мкг/мл и 10 мкг/мл: готовят разбавлением растворов металлов концентрацией 0,1 мг/мл дистиллированной водой

2—3 недель

Градуировочные растворы кон-

Устойчивы в течение

центрацией 0.02: 0,05 и 0.1 мкг/мл; готовят разбавление растворов металлов концентрацией 1 мкг/мл дистиллированной водой

1— 2 дней

Градуировочные растворы олова

Устойчивы в течение 1-й

должны содержать 5% (об.) концентрированной азотной кислоты; хранят их в полиэтиленовой посуде

недели

Определение

Оборудование

винилхлорида

Газовый хроматограф с пламен-

Тип 3700. Хром-5, *Ши-

но-ионизационным детектором и интегратором

Баллоны со сжатыми газами:

-    гелием

-    водородом"

-    воздухом"

мадэу»

Шприц стеклянный

Обьем 1.0 мл; цена деления 0.02 мл

Обозначение

межгосударственного

стандарта

ГОСТ 15860 ГОСТ 3022 ГОСТ 17433

Вид испытания.

Примерное оборудование.

Требования « оборудованию

Обозначение

межгосударственною

процедура

реактивы

и реактивам

стандарта

Определение

Шприц стеклянный

Объем 1—5 мл

винилхлорида

Шприц газовый

Объем 1—5 мл

Шприц микролитровый

Объем 50—500 мкл

Весы аналитические

Погрешность взвешиеа-

ния 0,1 мг

Секундомер

Флаконы стеклянные с резино-

Объем 60—65 мл

ГОСТ 8.423

выми прокладками и пластмассовыми крышками с отверстиями посередине

Стальная колонка 1.8 м х 3 мм.

заполненная 10%-ным Carbovax 20М на Cromosorb W-AW-DMCS 80/100 меш.

Флаконы пенициллиновые с си-

ликоновыми прокладками и герметичными крышками

Объем 10 мл

Реактивы

Винил хлористый С2Н3С1 газ Вода дистиллированная

Технический

ГОСТ 6709

Определение

Оборудование

диоктилфталата

УФ-спектрофотометр

Рабочий диапазон длин волн от 230 до 360 нм

Кюветы из кварцевого стекла

Толщина 1.0 см

Термостат водяной

Температура (37 ± 2) *С

Пикнометр

Рабочий диапазон плот-

ностей 0,9373—0.9378 г/мл

Секундомер Весы аналитические

Погрешность взвешива-

ГОСТ 8.423

ния 0.0002 г

Колбы мерные

Объем 100—1000 мл

ГОСТ 1770

Пипетки мерные Реактивы

Объем 1—10 мл

ГОСТ 29227

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709

Спирт этиловый С2Нг,ОН

ГОСТ 5962

Диоктилфталат С6Н4(СООСвН17)

Плотность

ГОСТ 8728

0.982—0.986 г/мл

Показатель преломле-

ния при 20 *С равен 1,486—1.487

Экстрагирующий раствор:

Плотность по пикномет-

смесь дистиллированной воды и

ру 0.9373-0.9378 г/мл

этилового спирта

Раствор диоктилфталата в этиловом спирте концентрацией 1 г/100 мл

Стандартные растворы диоктил-фталага в экстрагирующем растворе концентрациями:

1; 2: 5: 10; 20 мг/100 мл

23

Вид испытании.

Примерное оборудование.

Требования « оборудованию

Обозначение

межгосударственного

процедура

и реактивам

стандарта

Токсикологи-

ческие испыта-

ния

Определение

Оборудование

гемолитической

Центрифуга

6000 об/мин

активности

Фотометр

Тип КФК-3

Пробирки химические

Обьем 1—5 мл

ГОСТ 1770

Пипетки

Объем 1—2 мл

ГОСТ 29227

Штатив для пробирок Шприцы

Обьем 1—5 мл

Вата

ГОСТ 5556

Ножницы

Реактивы

Спирт этиловый 96%-ный

ГОСТ 5962

Хлорид натрия — водный раствор 0.9%-ный

ГОСТ 4233

Натрий лимонно-кислый 5.5-водный

ГОСТ 22280

Определение

Оборудование

острой токсично-

Весы лабораторные

Типа В Л КТ-500

ГОСТ 24104

сти

Шприцы

Лупа

Обьем 2 мл

Определение

Стаканчик химический

Обьем 50 и 100 мл

ГОСТ 23932

раздражающего

Пипетка глазная

действия

Шпатель

Лупа

Определение

Шприц

Обьем 1 мл

сенсибилизирую-

Пипетка глазная

щей активности

Шпатель

Весы лабораторные

Предел взвешивания

ГОСТ 24104

200 г

Пробирки центрифужные

Обьем 10 мл

ГОСТ 1770

Центрифуга

6000 об/мин

Стекла предметные Стекла покровные

Размер 18 X 18 мм

ГОСТ 6672

Электроплитка

Микроскоп

Пипетки пастеровские Груши резиновые Скальпель

Тип БМИ-3

Термостат

Бумага фильтровальная

Температура (40 ± 2) °С

ГОСТ 12026

Чашка фарфоровая Реактивы

Обьем 100 мл

ГОСТ 9147

Хлорид натрия — водный раствор 0.9%-ный

ГОСТ 4233

Парафин

ГОСТ 31209-2003

цепью приготовления маточного раствора спермы сливают в пробирку и тщательно перемешивают.

5.4.5.4    Приготовление р абочих обр азцов

В каждую пробирку контрольной и опытной серий помещают по 0,2 мл маточного раствора спермы.

5.4.5    5    Подготовка пробы к исследованию

Каждый рабочий образец переносят в кювету. Кювету герметизируют, устанавливают в кювет одер жат ель и помещают в стенд.

5.4.5    6    Накопление экспериментальных данных

Нажатием кнопки «ПУСК» включают процесс накопления

данных. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех кюветах отжатием кнопки «ПУСК>> производят остановку процесса накопления данных.

5 4 5.7    Обработка экспериментальных данных

Обработку экспериментальных данных осуществляют с помощью компьютера. Для каждого образца рассчитывают среднее время подвижности    в    условных    единицах

Е (т, х #) гт, '

где 7/ij — i- е значение пок аз ателя подвижно с ти;

i — текущий номер оценки показателя подвижности.

Для контрольной и опытной выборок образцов вычисляют среднее арифметическое значение и среднее квадратическое отклонение, по которым в свою очередь рассчитывают для каждой выборки коэффициент вариации С по формуле

с=-х 100%.

X

где х — среднее арифметическое значение.

30

ГОСТ 31209-2003

В случае получения значения коэффициента вариации более 15 % хотя бы для одной из выборок, эксперимент повторяют. Если значение коэффициента вариации для каждой из выборок меньше или равно 15 %, результаты считаются статистически верными.

Затем рассчитвают индекс токсичности 4по формуле

/т= -f X 100%, '?р

где 7О “Г К . —среднее арифметическое значений среднего

г ср* *ср

времени подвижности для опытной и контрольной

выборок

образцов соответственно.

5 4 5.8    Оценка результатов контроля

Испытуемую партию изделий считают нетоксичной, если индекс токсичности в пределах 70 % — 120 %. Во всех остальных случаях партию изделий считают токсичной.

5 4 6 Испьинання на стерильность

5.4.6.1    Испытания на стерильность методом прямого посева

5.4.6.1.1    Отбор проб

Количество проб, отбираемых для первичного посева, составляет 0,4 'IN, где N— количество изделий в серии или партии.

Мак с им а ль но е количество проб, отбираемых для первичного посева, составляет: 13 — при паровом методе стерилизации; 40 — при радиационном методе стерилизации.

Кроме изделий, направленных непосредственно на анализ, отбирают также дубликаты в тройном количестве: две части из них используют в случае необходимости для повторного контроля, одну часть оставляют для арбитражного хранения.

5.4.6.1.2    Испытания на стерильность

ГОСТ 31209-2003

Испытания на стерильность проводят методом прямого посева в тиогликолевум среду. Посевы помещают в термостат при температуре 32 °С и выдерживают 8 сут при паровом методе стерилизации или 14 сут при радиационном методе стерилизации, после чего проводят учет результатов.

5.4.62 Испытания на стерильность с использованием биотестов

5.4.6.2.1    Методика контроля стерильности полимерных контейнеров, стерилизованных паровым методом с помощью биотестов

5.4.6.2.1.1    Требования к биотесту

5.4.6.2.1    1 1 Биотест представляет собой носитель (инсулиновый флакон), содержащий споры микроорганизмов Вас. Stearotlirmopliilus ВКМВ-718 с регламентированной устойчив остью к пару.

5.4.6    2.1.1.2 Биотесты поставляются в комплекте, состоящем из носителей с высушенными спорами микроорганизма; цветной питательной среды; стерильного шприца и стерильных резиновых пробок размером 6,5; термовременных бумажных индикаторов; соответствующих эталонов цвета питательной среды и термоиндикаторов, а также инструкции по применению комплекта. Изготовитель биотестов должен быть аттестован.

5.4.6    2.1.1.3 Каждая партия биотестов сопровождается паспортом с указанием:

-    метода стерилизации, для которого предназначен биотест;

-    названия культур ы микроорг анизма;

-    количества спор в биотесте;

-    устойчивости биотеста к пару;

-    номер а пар тии;

-    срока годности;

-    условий хранения;

-    наименования предприятия-изготовителя.

ГОСТ 31209-2003

5.4.6.2.1.2    Контроль стерильности

5.4.62.1.2.1 Контролю подвергают каждую серию продукции, изготовленную на одном предприятии и про стерилизованную в одной стерилизационной камере за один цикл. Биотесты должны быть упакованы в пакеты из упаковочной бумаги, запечатанные в полиэтиленовые пакеты.

5.4.6.2.1.2.2    Число и расположение биотестов в стерилизационной камере зависят от размера камеры и типа стерилизатора (прямоугольный, круглый) в соответствии с таблицей 11

Таблица 11— Расположение контр о л ьных точек в пар о вых стер нлнзатор ах

Емкость камеры стерилиз атора, дм3

Общее число контрольных точек

Расположение контрольных точек

в стерилизационных коробках

вне стерилизационных коробок

До 100

Св. 100 до 750 Св. 750

Пр нмечанне -(разгрузочной даерн); 3 внутри стгрнлнзуечых у

5

11

13

-    Точка 1 — у загр)

—    13 — внутри стер паковок.

3

9

11

точной даерн; 2 — нлнзацноннон кам

2

2

2

у против оположной стенки еры на разных уровнях или

5.4    6.2.1.2.3 На предприятиях, длительное время осуществляющих стерилизацию на собственной базе, периодичность контроля, количество биотестов, помещаемых в камеру, могут быть изменены.

5.4.6.2.1.2.4    Методика и техника исследования биотестов

После цикла стерилизации биотесты извлекают и собирают в полиэтиленовый пакет, где они хранятся до проведения контроля стерильности. Для определения жизнеспособности популяции спор носители (флаконы) вынимают из защитной упаковки (до исследования флаконы допускается хранить 2 недели в холодильнике). Резиновую

 

Comments